上海地区海产品中副溶血弧菌的分离鉴定、分子分型及tdh基因的克隆表达

【摘要】副溶血弧菌(Vibrioparahaemolyticus,VP)广泛分布于沿岸海水、海底沉积物及虾类,蟹类和贝类等海产品中,属革兰阴性短杆菌,有致病菌株和非致病菌株之分。致病菌株可引起人类腹泻、恶心、呕吐、腹部痉挛,严重的可以引起昏迷、脱水甚至死亡。因此,建立灵敏快速的检测方法,了解副溶血弧菌在市售水产品的分布情况,对于食品卫生检测意义重大。为研究副溶血弧菌流行情况及毒力基因的分布情况,从上海部分农贸市场及海产品批发市场采集样品183份,共鉴定出弧菌疑似株195株。基于看家基因gyrB测序,将195株菌株确定到种的水平,包括副溶血弧菌(Vibrioparahaemolyticus)菌株137株(占70.3%)、溶藻弧菌(Vibrioalginolyticus)24株(占12.4%)、创伤弧菌(Vibriovulnificus)13株(占6.7%)和纳瓦拉弧菌(Vibrionavarrensis)3株(占1.6%)。选取副溶血弧菌的4种主要毒力因子：耐热直接溶血素(tdh)、耐热相关溶血素(trh)和Ⅲ型分析系统结构蛋白基因(vcrDl和vcrD2),进行PCR检测。结果显示,vcrD1检出率为100%,其它3种基因分别为tdh(1.5%),trh(0%),vcrD2(0.74%)采用ERIC-PCR方法对2011～2013年分离的副溶血弧菌菌株及标准株基因组DNA进行分型,结果显示副溶血弧菌采用此种分型方法能得到多态性较好的指纹图谱,能扩增出2至14个大小在100bp到4000bp之间的条带,将137株分为6群和16类,不同月份及来源样品有聚类趋势。分型结果与菌株的致病力有一定的相关性。ERIC-PCR分型快速简单,且较其他分子分型技术具备不要求模板序列已知而直接进行扩增的优点,适用于大量副溶血弧菌的快速分型研究,能够为副溶血弧菌食物中毒事件的预防和流行病学调查提供参考依据。对副溶血弧菌耐热直接溶血素基因(tdh)进行克隆、原核表达与免疫活性分析。结果表明,重组TDH蛋白主要以包涵体形式在大肠杆菌中表达,分子量大小约27kDa；Westernblotting分析表明,经过复性后的蛋白具有与天然蛋白相同的免疫反应性；重组蛋白免疫家兔,ELISA检测多抗血清效价在1：256000以上,为进一步研究TDH蛋白功能及副溶血弧菌快速检测方法奠定了基础。
【作者】李欣彤；
【导师】刘永杰；王权；
【作者基本信息】南京农业大学，预防兽医学，2013，硕士
【关键词】副溶血弧菌；分离；鉴定；毒力基因；分型；tdh表达；

【参考文献】
[1]陶丽艳.小学古诗文阅读教学研究[D].内蒙古师范大学,学科教学（专业学位）,2013,硕士.
[2]李灿,欧阳琴,谭超毅,李端茹,付峥嵘.湖南工业大学建环专业实践教学基地建设研究[J].中国电力教育,2014,02:193-195.
[3]李琳凤.我国粮食产业安全问题研究[D].北京交通大学,2013.
[4]徐元庆.壳聚糖对断奶仔猪生长性能的影响及其机理的研究[D].内蒙古农业大学,动物生产与管理,2013,硕士.
[5]韩晶.从顺应论角度分析英语新闻中的转喻[D].山西师范大学,外国语言学及应用语言学,2013,硕士.
[6]董敏.水体中无机阳离子对混凝—超滤联用工艺效能的影响[D].山东大学,环境科学与工程,2013,硕士.
[7]胡少康.酒店业思想政治教育工作研究[D].西北工业大学,马克思主义理论与思想政治教育,2004,硕士.
[8]谢安.肉苁蓉及淫羊藿对小鼠早期胚胎体内外发育及IGF-2细胞因子影响[D].新疆农业大学,临床兽医学,2012,硕士.
[9]王兰化,李明明,张莺,马武明,崔凯鹏,王志强.华北地区某蔬菜基地土壤重金属污染特征及健康风险评价[J].地球学报,2014,02:191-196.
[10]韦子迎.基于球面阵列的心音定位方法研究[D].哈尔滨工业大学,信息与通信工程,2013,硕士.
[11]逯志宏,张军,马文静.SVC静止型动态无功补偿在电网中的应用[J].冶金自动化,2002,04:70-71.
[12]张超.A进出口公司发展战略研究[D].北京交通大学,2014.
[13]马亮.主题农业园规划设计研究[D].南京农业大学,风景园林,2012,硕士.
[14]王亮.基于淘宝开放平台的商品评价分类研究[D].内蒙古科技大学,计算机技术,2014,硕士.
[15]刘丽.氧化石墨烯及其复合材料的制备及对贵金属的吸附行为研究[D].吉林大学,分析化学,2013,硕士.
[16]刘日辉.吉林省1621例肺结核患者病例分析[D].吉林大学,流行病与卫生统计学,2014,硕士.
[17]陈培培.论检察官客观义务的实践限度[D].苏州大学,诉讼法学,2014,硕士.
[18]宋世燕,何海平,孙陆威,叶志镇.退火对金属表面等离激元增强ZnO薄膜发光的影响[J].材料科学与工程学报,2014,03:331-334.
[19]邵爽.密尔的功利主义幸福思想[D].吉林大学,马克思主义哲学,2013,硕士.
[20]董淑棉,郭炎伟.注浆止水技术在热力工程竖井施工中的应用[J].现代隧道技术,2014,02:182-187.
[21]宋海洋.过山车轮轨摩擦实验台设计及动态性能研究[D].大连理工大学,机械制造及其自动化,2013,硕士.
[22]舒月,张勇.基于案例推理的测试序列生成方法研究[J].铁路计算机应用,2014,06:16-20.
[23]D.米秋恩,P.泰瑞尔.宽线剖面——一个三维地震的野外和处理技术(赴加、法石油考察团技术资料)[J].石油地球物理勘探,1973,03:48-88.
[24]杜培军,李向群,盛业华.对高校地理信息系统专业计算机类课程设置的探讨[A].中国地理信息系统协会、高等学校测绘学科教学指导委员会、高等学校地理科学类专业教学指导分委员会.首届地理信息系统专业教育研讨会论文集[C].中国地理信息系统协会、高等学校测绘学科教学指导委员会、高等学校地理科学类专业教学指导分委员会:,2003:5.
[25]赵晓丽.石榴状PA/SiO_2接枝复合乳胶的原位法制备及其胶膜结构形成机制[D].浙江理工大学,纺织化学与染整工程,2014,硕士.
[26]夏秀春.腰椎手术并发症的原因分析及预防策略[D].山西医科大学,外科学,2013,硕士.
[27]于伟,谢华清,陈立飞,周晓锋.高导热含石墨烯纳米片尼龙6复合材料[J].工程热物理学报,2013,09:1749-1751.
[28]张伟.基于DSP的视频压缩算法的实现[D].西北工业大学,信号与信息处理,2004,硕士.
[29]张太阳.基于石墨烯/纳米银新型功能组装体的构筑及其性能研究[D].上海应用技术学院,2014.
[30]卢甜.多元智能理论下的高中英语“文化角落”教学探究[D].四川外国语大学,英语语言文学,2013,硕士.
[31]邵星海.纳米陶瓷颗粒增强高铬铸铁铸渗层的组织和耐磨性研究[D].河南科技大学,材料加工工程,2013,硕士.
[32]陈珂.高铁接触网主动维修策略研究[D].西南交通大学,电气工程,2014,硕士.
[33]陈士松.外国公司向中国国家工作人员行贿犯罪研究[D].浙江大学,刑法学,2012,硕士.
[34]夏露.学案导学教学模式在网球教学中的实验研究[D].北京体育大学,体育教育训练学,2013,硕士.
[35]王潇.单裂隙中粗糙元及其疏密度对水流特性影响模拟研究[D].合肥工业大学,环境工程（专业学位）,2014,硕士.
[36]徐寿波.大物流论[J].中国流通经济,2005,05:4-7.
[37]李磊.高等职业教育质量保障体系比较研究[D].西安科技大学,矿业工程,2013,硕士.
[38]王利.恒温恒湿空调机组临界盘管模式研究[D].西南交通大学,供热、供燃气、通风及空调工程,2014,硕士.
[39]杨蕾.毕业大学生党员组织关系管理问题探析[D].河北师范大学,政治学理论,2012,硕士.
[40]高飞.虹螺山—五指山地区金矿资源预测[D].辽宁工程技术大学,矿产普查与勘探,2012,硕士.
[41]严俊勇.凉山州旅游业发展的环境与策略研究[D].电子科技大学,2004.
[42]梅德清任华姜士阳BaarRoland.DMC/柴油混合燃料共轨柴油机的燃烧循环变动研究[J].农业机械学报,2014,07:.
[43]段瑞.对第12届世界健美操锦标赛竞技六人成套动作编排的分析[D].内蒙古师范大学,运动训练（专业学位）,2013,硕士.
[44]侯继华,黄建辉,马克平.东灵山辽东栎林主要树种种群11年动态变化[J].植物生态学报,2004,05:609-615.
[45]姚元.3种芳香植物单方及其复方精油的成分分析及抗真菌作用[D].新疆农业大学,生物化学与分子生物学,2012,硕士.
[46]曹红凤.用于弱目标检测的粒子滤波检测前跟踪算法[D].西安电子科技大学,电子与通信工程,2012,硕士.
[47]周思明.应对气候变化措施与WTO规则的冲突与协调[D].河北经贸大学,国际法学,2012,硕士.
[48]李雨峰.论追续权制度在我国的构建——以《著作权法》第三次修改为中心[J].法律科学(西北政法大学学报),2014,01:126-136.
[49]李鹏.选区激光熔化制备多孔不锈钢材料工艺与特性研究[D].中北大学,材料加工工程,2014,硕士.
[50]段强华.基于生物量的达理雅博依绿洲植被的生态系统服务价值评价[D].新疆大学,生态学,2013,硕士.